La lyse d’Escherichia coli pathogène par des bactériophages libère moins d’endotoxine que par les β-lactames


ContexteAutre de nombreuses données expérimentales évaluant l’efficacité de la thérapie par les phages, les questions relatives à la sécurité de cette approche ne sont pas suffisamment traitées, en particulier, car les phages peuvent tuer les cellules bactériennes au sein de & lt; minutes, la libération d’endotoxine associée ER dans les infections sévères causées par des bactéries gram-négatives pourrait être un sujet de préoccupationMéthodesDeux phages thérapeutiques virulents et antibiotiques de référence ont été étudiés in vitro pour leur capacité à tuer les souches pathogènes d’Escherichia coli et générer un ER. a été évaluée au fil du temps en étudiant la viabilité cellulaire instantanée, le nombre d’unités formant une colonie, la concentration d’endotoxine libre libérée et la morphologie cellulaire sous microscope optique.Résultats Alors que les β-lactamines ont un effet relativement lent, les deux phages testés, comme Même en considérant la lyse des cellules phagiques la plus rapide en quelques minutes, les concentrations d’ER induites par les phages n’ont jamais atteint les valeurs les plus élevées enregistrées avec les traitements antibiotiques Concentrations cumulées d’endotoxine au fil du temps dans les phages les conditions traitées étaient inférieures à celles observées avec le β-lactame Alors que les β-lactamines étaient responsables de changements importants de la morphologie cellulaire sphéroplastes avec l’imipénème, les cellules filamenteuses avec la céfoxitine et la ceftriaxone, l’amikacine et les phages ne modifiaient pas la forme cellulaire mais produisaient des corps d’inclusion intracellulaires. Ce travail fournit des données importantes et réconfortantes. la sécurité de la thérapie par les phages Les phages thérapeutiquement pertinents, avec leur faible profil de libération des endotoxines et leur effet bactéricide rapide, ne sont pas inférieurs aux β-lactamines.

Thérapie par les phages, endotoxines, innocuité, lyse cellulaire, β-lactaminesVoir le commentaire éditorial de Reindel et Fiore en pages «Les bactéries, particulièrement gram-négatives, étant plus résistantes que jamais aux antibiotiques multiples, la recherche de traitements alternatifs est maintenant fortement encouragée par Outre leur capacité à contrôler la croissance bactérienne, ces alternatives doivent également être évaluées en termes de sécurité. En particulier, les stratégies menant à la destruction physique des cellules bactériennes doivent être étudiées avec Les phages bactériophages sont des virus qui infectent les bactéries, et leur utilisation pour traiter les infections bactériennes est une thérapie par phages. l’objet de nombreuses études expérimentales ainsi que quelques essais cliniques [- ] Cependant, alors qu’il a été initié il y a presque plusieurs années, de nombreux aspects de la sécurité des phages n’ont pas encore été complètement étudiés Etant donné leur capacité à tuer leurs hôtes très rapidement, en quelques minutes, le problème d’innocuité lié à la libération d’endotoxines a été peu étudié. ] Endotoxine bactérienne Le domaine hydrophobe du lipopolysaccharide présent dans la membrane externe des bactéries gram-négatives est l’un des inducteurs les plus puissants de la réponse cytokinique pro-inflammatoire chez les patients infectés par des pathogènes à Gram négatif, et joue un rôle important dans la physiopathologie de choc septique En conséquence, le taux d’endotoxine sanguine chez les patients infectés est corrélé à la sévérité de la sévérité et à la survie Les antibiotiques bactéricides provoquent une libération d’endotoxine ER au cours du temps et l’amplitude de cette libération dépend de la classe pharmacologique de la molécule Comme évalué par des données in vitro et in vivo chez l’animal , l’utilisation d’antibiotiques puissants libérant des endotoxines peut être préjudiciable en termes d’inflammation et de survie Chez l’homme, même si l’utilisation de tels antibiotiques pourrait être associée à une réponse inflammatoire plus élevée, cela ne s’est pas traduit jusqu’à présent par des différences de mortalité A notre connaissance, seules question d’ER induite par les phages utilisant un phage déficient en lyse ou un phage filamenteux non-lytique exprimant un gène toxique chez l’hôte Ils ont montré que ces phages libéraient moins d’endotoxines que ceux de type sauvage ou qu’un phage lytique utilisé comme contrôle Cependant, aucune de ces études n’a comparé les phages à différents antibiotiques dans leur capacité respective à libérer l’endotoxine dans une échelle de temps courte correspondant à la lyse rapide induite par les phages.Dans cette étude, nous visions à comparer l’efficacité des phages virulents , _P et LM_P, tous deux infectant des isolats cliniques d’Escherichia coli, à des classes d’antibiotiques, ainsi que pour déterminer le niveau d’endotoxine libérée par ces agents antibactériens. d que les deux phages ont tué les bactéries plus rapidement et ont libéré moins d’endotoxine que les β-lactamines. Ces résultats font valoir que les phages ne sont pas plus nocifs que certains antibiotiques couramment utilisés en milieu clinique.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Bactéries et phages

La souche d’Escherichia coli sensible à tous les antibiotiques cliniquement significatifs et au complexe LM ST-Ob: H clonal sont des isolats cliniques, responsables d’une pyélonéphrite et d’une pneumonie associée à un ventilateur , respectivement Les paramètres infectieux du phage _P a Myoviridae, kbp, la souche infectante a été déterminée comme décrit dans et comparée à celles précédemment obtenues avec LM_P a Podoviridae, kbp, souche infectante LM Les données sont présentées dans le tableau et dans la figure supplémentaire Ces phages ont été purifiés à partir d’un lysat bactérien , y compris une étape finale d’enlèvement des endotoxines EndoTrap Blue, Hyglos, Allemagne réalisée fois

Antibiotiques: choix, test de sensibilité et concentration

La méthode de diffusion du disque et Etests bioMérieux, France ont été utilisées pour déterminer la sensibilité aux antibiotiques et la concentration minimale inhibitrice MIC, selon les directives EUCAST Pour la souche, les antibiotiques suivants ont été testés la CMI est indiquée entre parenthèses: amikacine mg / L, ceftriaxone mg / L et imipénème mg / L Pour la souche LM exprimant une β-lactamase à spectre étendu, les antibiotiques testés étaient l’amikacine mg / L, la céfoxitine mg / L et l’imipénème mg / L. Les solutions antibiotiques ont été préparées extemporanément à partir de formulations intraveineuses utilisées pour humains Mylan, Canonsburg, Pennsylvanie et ont été reconstitués avec de l’eau stérile sans endotoxine aqua ad iniectabilia, B-Braun, Allemagne pour être utilisé à une concentration finale de -plier la CMI Cette concentration antibiotique a été choisie selon les données in vitro et in vivo liées pharmacodynamique et pharmacocinétique des aminoglycosides et des β-lactamines De telles concentrations sont également un objectif recommandé dans les situations cliniques où des infections sévères sont présentes, pour assurer une activité bactéricide optimale Dans le même but, les phages ont été utilisés à une multiplicité d’infection MOI & gt; MOI:, sur la base de nos données in vivo antérieures [-,]

Essais de temps-tuer

Des essais classiques de destruction du temps ont été réalisés selon les recommandations de l’American Society for Microbiology . En bref, des bactéries exponentiellement cultivées à ° C, tr / min, dans du bouillon Mueller-Hinton II Sigma-Aldrich, Allemagne ont été diluées avec du milieu frais. environ cellules / ml Trente millilitres ont ensuite été aliquotés uniformément dans des fioles d’Erlenmeyer correspondant aux différentes conditions: une culture sans agents antibactériens; cultures avec des antibiotiques, et; et une culture avec des phages Au temps T, des agents antibactériens ont été ajoutés et chaque flacon a été échantillonné à,,,, et minutes. Le contrôle sans agents antibactériens a également été échantillonné à T Le titre bactérien en triple, la viabilité bactérienne instantanée en triple et le Le seuil de détection du nombre d’unités CFU formant une colonie est de × CFU / mL. Les analyses de Killing et les analyses subséquentes sont répétées indépendamment deux fois pour chaque souche. Les observations microscopiques sont effectuées sur des échantillons prélevés en quelques minutes avec le volume de culture restant. Après centrifugation g, minutes, le culot a été remis en suspension dans des pL de solution saline tamponnée au phosphate et on a laissé tomber une pL sur une lame de verre à observer avec un microscope à contraste de phase.

Mesures d’endotoxines

Les concentrations d’endotoxines libres ont été dosées quantitativement sur des cultures filtrées. Filtre en Poly-Ethylen-Sulfone μm, Sartorius, France en utilisant un essai de Limulus Amebocyte Lysate Endotox R-fact C, Hyglos, Allemagne, après dilution: et conformément aux instructions du fabricant. le test a été vérifié; aucune interférence causée par le milieu ou les phages n’a été remarquée

Test de viabilité cellulaire instantanée

La viabilité cellulaire a été évaluée en mesurant la teneur en adénosine triphosphate intracellulaire en utilisant le test BactTiter-Glo et un lecteur de plaque Glomax-MultiDetection System Promega, Madison, Wisconsin

Analyse statistique et modélisation

Des régressions non linéaires à partir de points expérimentaux concernant l’évolution de la concentration d’endotoxine libre selon le temps ont été réalisées en utilisant GraphPad Prism version GraphPad Software, La Jolla, Californie avec les équations suivantes où y = concentration d’endotoxine, x = temps: les données obtenues avec Ceftriaxone étaient régis par une courbe exponentielle {y = yekx}, l’amikacine et les phages étaient régis par une courbe exponentielle inverse {y = yplateau-yo-e-kx}, tandis que l’imipénème et la céfoxitine étaient gouvernés par une fonction sigmoïde {y = Vmaxxh / Kxh Les zones sous la concentration de la courbe d’endotoxine libre en fonction du temps ont été calculées en utilisant la méthode de trapèze avec MatLab MathWorks, France. L’entrée pour ces calculs était les courbes de régression non linéaire obtenues de chaque intégration de réplique aux minutes, fréquence d’échantillonnage: toutes les secondes

RÉSULTATS

Les phages tuent les bactéries plus rapidement que les β-lactames

Les bactéries cultivées dans un bouillon liquide ont été exposées à des antibiotiques (multiplication de la CMI ou des phages) et des échantillonnages multiples ont été effectués pendant quelques minutes pour l’évaluation de l’abattage et l’abondance bactérienne a été évaluée à l’aide de méthodes complémentaires analysant différents signaux physiologiques. après une incubation nocturne de dilutions en série et un test de viabilité cellulaire instantanée qui mesure la quantité de cellules métaboliquement actives En effet, ce dernier paramètre n’est pas pris en compte avec la méthode de la gélose: Les cellules vivantes mais condamnées à mort quelques heures plus tard Inversement, lorsque les bactéries sont titrées sur une plaque de gélose, la pression inhibitrice est éliminée, en particulier lorsqu’une forte dilution est effectuée pour compter les UFC individualisées: dans de telles conditions, on ne compte pas sur les plaques de gélose. un cadre, les bactéries faiblement métaboliquement actives ne sont plus entourés par l’agent antibactérien Nous avons observé que la diminution des cellules capables de croître sur une plaque de gélose CFU compte, Figure et la diminution des cellules métaboliquement actives test de viabilité cellulaire instantanée, Figure étaient plus rapides avec des phages que avec des β-lactamines quelle que soit la molécule considérée Les aminoglycosides et les phages ont été les seuls agents antibactériens à diminuer rapidement la biomasse bactérienne indirectement évaluée par le test de viabilité cellulaire, alors qu’aux stades les plus précoces, les β-lactamines n’abolissaient pas la croissance cellulaire. Les numérations UFC dans les conditions traitées par les phages ont atteint et consigné les souches LM et, respectivement, tandis que l’amikacine a fourni une diminution de et log, respectivement, et l’imipénème une diminution de et log

Figure Vue largeDownload slideColony-forming unit UFC dénombrements de souches LM et selon la durée LMain LM A et souche B ont été cultivées en absence contrôle ou présence d’agents antibactériens: phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques -plier la concentration minimale inhibitrice Les données sont des moyennes avec déviation standard, et la ligne pointillée représente le seuil de détectionFigure View largeTélécharger la lameOnglet formant une CFU Nombre de CFU de souches LM et selon la durée LMa LM et la souche B ont été cultivées en absence de contrôle ou présence d’agents antibactériens: phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques – plie la concentration minimale inhibitrice Les données sont moyennes avec écart-type, et la ligne pointillée représente le seuil de détection

Figure View largeTélécharger la lameRelative de cellules métaboliquement actives selon le temps en présence de différents agents antibactériens Souche LM A et souche B ont été cultivées en absence de contrôle ou présence d’agents antibactériens: phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques -plier le minimum Concentration inhibitrice Les cellules viables ont été quantifiées en utilisant un dosage de la luciférase ATP voir Méthodes Les données sont des moyennes avec écart-type et l’axe des y est en échelle logarithmique Abréviation: RLU, unité de luminescence relativeFigure Voir grandTélécharger la diapositiveRelative de cellules métaboliquement actives en fonction du temps présence de différents agents antibactériens La souche LM A et la souche B ont été cultivées en absence de contrôle ou en présence d’agents antibactériens: phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques -plier la concentration inhibitrice minimale Les cellules viables ont été quantifiées à l’aide d’une luciférase ATP dosage voir Méthodes Les données sont des moyennes avec des devi standard Abréviation: RLU, unité de luminescence relative En accord avec ses caractéristiques cinétiques Tableau, le phage LM_P était l’agent antibactérien le plus rapide sur la souche LM car les CFU étaient en dessous du seuil des cellules de détection à quelques minutes. Figure A Parmi les antibiotiques, seule l’amikacine a entraîné une réduction du logarithme à ce moment-là. En examinant les cellules métaboliquement actives, nous avons également confirmé que le phage LM_P était l’agent de destruction le plus rapide, suivi par l’amikacine, la céfoxitine et l’imipénème. , le nombre de CFU dans l’échantillon traité par les phages a augmenté par rapport aux points précédents, alors que le nombre de cellules métaboliquement actives est resté très faible Ceci suggère qu’une population résiduelle avec une activité métabolique faible a pu survivre en présence de phages et plus tard pour se développer sur des plaques d’agar une fois que la pression des phages est réduite

Paramètres du tableau du cycle viral du phage LM_P et _P Paramètre LM_P _P Constante d’adsorption, mL / min% IC K = × – à × – K = × – à × – … K = × – à × – Période de latence b, min Période d’éclipse , min Burst size, PFU% CI – – Paramètre LM_P _P Constante d’adsorption, mL / min% IC K = × – à × – K = × – à × – … K = × – à × – Période de latenceb, min Période d’éclipsec, min Burst size, PFU% IC – – Abréviations: IC, intervalle de confiance; PFU, plaque formant unitaire aPhage LM_P a une cinétique d’adsorption en un temps tandis que le phage _P a une cinétique en une étape rapide suivie d’une plus lente; voir les données supplémentaires, conduisant à différentes constantes d’adsorption bLa période latente correspond au temps écoulé entre l’infection cellulaire et la lyse cellulaire cLa période d’éclipse correspond au temps écoulé entre l’infection cellulaire et la détection des premiers virions intracellulaires fonctionnels, avant la lyse cellulaire. ses propriétés virales intrinsèques, le phage _P présentait une cinétique plus lente que le phage LM_P pour réduire le nombre de CFU et la quantité de cellules métaboliquement actives. Le phage _P était aussi plus lent que l’amikacine mais restait plus rapide que l’imipénème et la ceftriaxone. La CMI de l’amikacine pour la souche est mg / L et cette souche présente une résistance à la streptomycine seulement alors que la souche LM a plusieurs résistances additionnelles à l’aminoglycoside streptomycine, la kanamycine, la gentamicine et la nétilmicine avec un amikacine CMI de mg / L, qui est la limite supérieure pour classer les souches d’E. Coli comme étant encore sensibles

La morphologie des cellules bactériennes exposées à l’amikacine ou aux phages est faiblement affectée

Des observations microscopiques directes, effectuées après des heures d’exposition à chacun des agents antibactériens, ont confirmé que les β-lactamines induisaient des changements morphologiques cellulaires intenses. Figure: Ceftriaxone et, dans une moindre mesure, la céfoxitine étaient responsables d’une filamentation massive tandis que l’imipénème À l’inverse, les cellules obtenues à partir de cultures traitées avec de l’amikacine ou des phages ont montré une forme préservée Il est intéressant de noter que ces cellules contenaient des corps d’inclusion intracellulaires typiques, sans différence identifiable entre l’amikacine et les cellules traitées par les phages.

Figure Vue largeTélécharger la lameMorphologie des cellules d’Escherichia coli après une exposition de -heure aux différents agents antibactériens Les cultures liquides des souches LM et en absence de contrôle ou de présence d’agents antibactériens antibiotiques avec une concentration de -plier la concentration minimale inhibitrice, les phages LM_P ou _P avec un La multiplicité d’infection a été centrifugée pour concentrer la biomasse résiduelle. Les préparations humides ont ensuite été observées sous contraste de phase × lentilleFigure View largeTélécharger la diapositiveMorphologie des cellules d’Escherichia coli après une exposition de -heure aux différents agents antibactériens Les cultures liquides des souches LM et en absence contrôle ou présence d’antibactériens antibiotiques avec une concentration de -plier la concentration minimale inhibitrice, les phages LM_P ou _P avec une multiplicité d’infection ont été centrifugés pour concentrer la biomasse résiduelle. Les préparations humides ont ensuite été observées sous contraste de phase × lentille

Les phages libèrent autant d’endotoxine que l’amikacine mais beaucoup moins que les β-lactames

Initialement T, les concentrations d’endotoxine libre dans le milieu étaient de ± et ± EU / mL pour les souches LM et, respectivement, ER selon l’époque n’était pas identique parmi les antibactériens. agents étudiés Figure Alors que l’ER associé à la ceftriaxone était gouverné par une courbe exponentielle, l’amikacine et les phages étaient gouvernés par une courbe exponentielle inverse, une élévation rapide suivie d’un plateau et d’un imipénème avec la céfoxitine par une fonction sigmoïde. pour la ceftriaxone, mais a augmenté soudainement à des moments plus tard, un phénomène également présent mais dans une moindre mesure avec l’imipénème

Figure Vue largeDownload slideConcentration de l’endotoxine libre libérée dans le milieu de culture au fil du temps par des cellules exposées à différents agents antibactériens La souche LM A et la souche B ont été cultivées en présence de phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques Les courbes sont des régressions non linéaires à partir de ces points. Voir les abréviations: EU, unité d’endotoxinesFigure View largeTélécharger la lameConcentration de l’endotoxine libre libérée dans le milieu de culture au fil du temps par des cellules exposées à différents agents antibactériens Souche LM A et la souche B a été cultivée en présence de phages LM_P ou _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques -plier la concentration inhibitrice minimale Les symboles sont les moyens d’expériences indépendantes avec écart type Les courbes sont des régressions non-linéaires à partir de ces points voir Méthodes Abréviation: UE, endotoxine unitéComparé à T, la variation de la quantité d’endotoxine libérée par la lyse de la souche LM après minutes était ± avec le phage LM_P, ± avec l’amikacine, ± avec la céfoxitine, et ± avec l’imipénème avec la souche, ce changement était ± avec l’amikacine, ± avec phage _P, ± avec imipenem, et ± avec ceftriaxonePour obtenir une vue d’ensemble plus complète de l’ER, nous avons calculé l’ASC représentant la quantité cumulée d’endotoxine libérée au cours du temps. Figure Les valeurs les plus basses enregistrées étaient celles obtenues avec les phages et l’amikacine. des valeurs ont été obtenues avec l’imipénème et la ceftriaxone. Dans les expériences avec les souches LM et, respectivement, l’ER était – et – plus élevé avec l’imipénème qu’avec le phage correspondant

Figure View largeTélécharger les diapositives sous la concentration de l’endotoxine libre en fonction de la courbe temporelle en minutes La souche LM gauche et la souche droite ont été cultivées en présence de phages respectivement, LM_P et _P, multiplicité d’infection ou antibiotiques – multiplier la concentration minimale inhibitrice. avec écart-type Abréviations: AUC, aire sous la courbe; UE, unité d’endotoxinesFigure View largeTélécharger les diapositives sous la concentration d’endotoxine libre en fonction de la courbe temporelle en minutes Souche LM gauche et souche droite cultivées en présence de phages respectivement, LM_P et _P, multiplicité d’infection ou d’antibiotiques – multiplier la concentration minimale inhibitrice Les données sont des moyennes avec écart-type Abréviations: AUC, aire sous la courbe; UE, unité d’endotoxines

DISCUSSION

comparé aux antibiotiques Nous avons observé que l’effet antibactérien de différents phages ayant un potentiel thérapeutique avéré était très proche de celui obtenu avec l’amikacine, en termes de réduction de la biomasse, de vitesse d’action, de modification de la morphologie cellulaire et d’ER. De plus, par rapport aux β-lactames, ces phages présentaient une lyse bactérienne plus rapide, associée à un ER plus faible. Les mécanismes d’action de chacun des agents antibactériens testés sont des cibles moléculaires et une durée différentes. Les phages reposent sur des holins et des lysines peptidoglycanes hydrolases. déclencher la lyse des cellules à la fin de leur cycle infectieux , tandis que l’amikacine est un inhibiteur de synthèse protéique se liant à l’ARN ribosomique S de la sous-unité ribosome S Ceftriaxone une troisième génération de céphalosporine, imipénème un carbapénème et céfoxitine a céphamycine sont tous β- Lactamines inhibant la synthèse du peptidoglycane en interagissant avec les protéines liant la pénicilline PBP Plus précisément, la ceftriaxone Ro – se lie principalement à PB P- et induit un fort taux de filament avec retard de lyse et est considéré comme un puissant relargueur d’endotoxines L’imipénème se lie essentiellement à la PBP, induit la formation de sphéroplastes , et est considéré comme un relargueur d’endotoxine “intermédiaire” La fixation de la céfoxitine est plus spécifique de la PBP et induit une filamentation limitée, et pourrait donc être considérée comme un relargueur d’endotoxines «faible», comme les aminosides Nos observations microscopiques sont en accord avec ces mécanismes d’action spécifiques. De manière intéressante, les cellules traitées par phage et amikacine ont montré des corps d’inclusion similaires, précédemment signalés lorsque E coli est exposé aux aminoglycosides Nous n’avons pas trouvé dans la littérature de changements intracellulaires similaires dans les cellules soumises à la prédation par les phages. comme ces corps d’inclusion sont liés à des agrégats de protéines induites par des erreurs de traduction et étant donné que les phages sont connus pour interférer avec bact synthèse plus intéressante des protéines au cours du cycle viral, celles-ci peuvent avoir la même origine Plus intéressant est le lien putatif entre ces observations et les plus faibles niveaux d’endotoxines libérées par les cellules traitées par les phages ou les amikacines. contrairement aux β-lactames, les deux phages et l’amikacine évitent une augmentation de la biomasse cellulaire anormale, par exemple avec des cellules filamenteuses qui lyseront tôt ou tard, et libéreront une quantité d’endotoxine proportionnelle à sa biomasse. Une autre observation clé est l’action rapide des phages. plus complexe et un mode d’action fortement temporisé visant à détourner plusieurs voies intracellulaires , les phages strictement lytiques semblent paradoxalement plus rapides que les β-lactames in vitro Parmi la population très diversifiée des phages, cette rapidité est un trait commun même si important des différences existent en termes de vitesse de lyse cellulaire allant de & lt; minutes à & gt; heure, à ° C Nous pensons que les phages testés ici sont des candidats particulièrement bons sur ce point. Plusieurs limites doivent être discutées dans notre étude. Premièrement, nos résultats sont liés à un nombre limité de phages et d’antibiotiques. étude ont des paramètres cinétiques favorables Comme la longueur du cycle viral est l’un des paramètres clés de la modélisation pharmacocinétique du phage , nous ne pouvons exclure la possibilité que des phages plus lents aient pu aboutir à des résultats différents. β-lactamines et aminoglycosides car ces classes d’antibiotiques appartiennent au traitement de première intention de nombreuses infections sous leurs formes sévères telles que la pyélonéphrite. En tant que molécules à «valeur solide», elles sont recommandées pour le traitement des infections gram-négatives potentiellement mortelles. , en particulier chez les patients neutropéniques Autre que ces comparateurs valides, ce qui aurait été observé si d’autres médicaments avaient été testés tels que les quinolones est op En conclusion, la traduction de nos résultats au contexte in vivo pourrait être limitée: Une possible surestimation de l’efficacité des aminoglycosides pourrait être présente dans des expériences de courbe temporelle avec une souche due au transfert d’antibiotiques, car le faible nombre de cellules viables placer des échantillons non dilués; in vivo, un acteur clé supplémentaire représenté par le système immunitaire inné principalement avec des polymorphonucléaires est impliqué dans la lyse des cellules bactériennes De plus, les concentrations de tissus antibiotiques pourraient être très variables dans le milieu clinique chez les personnes et fluctuer au fil du temps. Pour conclure, ce travail fournit des données réconfortantes concernant l’innocuité des phages thérapeutiquement pertinents liés à l’endotoxine, caractérisés par leur faible profil de libération d’endotoxines et leur effet bactéricide rapide. Une évaluation in vivo de la libération d’endotoxines doit maintenant être effectuée pour confirmer et renforcer nos résultats, ce qui soutiendra le développement de la thérapie phagique

Données supplémentaires

Les documents supplémentaires sont disponibles sur Clinical Infectious Diseases en ligne. Les données fournies par les auteurs étant destinées au lecteur, les documents publiés ne sont pas copiés et relèvent de la seule responsabilité des auteurs. Les questions ou les commentaires doivent donc être adressés à l’auteur correspondant.

Remarques

Remerciements Nous remercions Dwayne R Roach pour ses discussions critiques Nous remercions chaleureusement Yvonne Cloarec pour les révisions en anglais et Olivier Sauvage pour ses contributions utiles au logiciel MatLab. Soutien financier Ce travail a été soutenu par une subvention de recherche conjointe de l’Institut Pasteur et de l’Assistance Publique-Hôpitaux de Paris Poste d’Accueil pour Praticien Hospitalier Conflits d’intérêts potentiels LD a reçu des subventions et des frais personnels de Ferring SA JD R a reçu une couverture de frais de voyage pour assister à des réunions scientifiques de Fisher & amp; Paykel Tous les autres auteurs ne signalent aucun conflit potentiel Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels de conflits d’intérêts que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués